sábado, 25 de marzo de 2017

APLICACIONES: CONSTRUCCIÓN DE GENOTECAS

1. OBTENCIÓN DE GENOTECAS (Genomic libraries)
Una genoteca genómica (ADNg) es un tipo útil de genoteca que contiene fragmentos del ADN genómicos generados mediante la digestión parcial con cantidades limitantes de una enzima de restricción la cual efectúa cortes en determinados sitios con una frecuencia elevada en el genoma. Como consecuencia, se produce una digestión parcial del ADN, de modo que sólo tiene lugar la fragmentación de unos cuantos sitios de restricción, quedando el resto intacto.
Se genera así una colección de fragmentos superpuestos con una longitud idónea para la clonación en un vector de clonación. Tras ligar el vector y el fragmento de ADN, se introduce en una célula hospedadora.
Una genoteca de ADN complementario  (ADNc)es un tipo de genoteca que contiene copias de ADN complementario de la población de ARN mensajero presente en un determinado tejido. Este tipo de genoteca tiene varias ventajas
como que el clon obtenido contiene solamente los exones de un gen, y por lo tanto es una representación directa de la secuencia codificante de un gen, sin los intrones ni otras secuencias promotoras.
La clonación del ADNc se basa en la acción de la transcriptasa inversa, una ADN polimerasa dependiente de ARN derivada de retrovirus. Algunos vectores hábilmente construidos, llamados vectores de expresión, contienen señales de transcripción y de traducción adyacentes al lugar de inserción del ADNc, haciendo posible la transcripción y traducción en bacterias, hongos o células en cultivo, de una molécula de ADNc de longitud completa para poder así producir la proteína que codifica.
Resultado de imagen para genotecaSon imprescindibles como paso previo para la secuenciación de genomas. La primera genoteca la hizo Frederick Sanger (dos veces Nobel de Química) como paso previo a la secuenciación del genoma del fago φX174, de 5,3 Kb.

Para detectar las colonias que llevan clonado un determinado gen se realiza Hibridación de colonias puesta de manifiesto por manchas (Colony Blot Hibridation):
 
 

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